-
Ulei esențial de eucalipt pur și natural pentru aromaterapie, pentru îngrijirea pielii și a corpului
Metodă de extracție sau procesare: distilare cu abur
Partea de extracție prin distilare: frunză
Originea țării: China
Aplicație: Difuzie/aromoterapie/masaj
Termen de valabilitate: 3 ani
Serviciu personalizat: etichetă și cutie personalizate sau conform cerințelor dumneavoastră
Certificare: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA
Uleiul de eucalipt reacționează cu mucusul și îl fluidifică pentru a oferi o ușurare instantanee a dificultăților de respirație și a altor probleme respiratorii. Este suficient de puternic pentru a acționa ca repelent pentru insecte. Atunci când este utilizat în aromaterapie, oferă claritate gândurilor. Beneficiile sale terapeutice se datorează proprietăților sale antimicrobiene, antibacteriene, antiseptice, antispasmodice și antivirale. Folosește uleiul de eucalipt împotriva unei varietăți de afecțiuni ale pielii și ale sănătății. Conține eucaliptol, cunoscut și sub numele de cineol. Acest compus va susține sănătatea și bunăstarea ta generală.
-
Ulei esențial de lavandă naturală, pură și organică, pentru îngrijirea pielii prin aromaterapie
Metodă de extracție sau procesare: Distilare cu abur
Partea de extracție prin distilare: Floare
Originea țării: China
Aplicație: Difuzie/aromoterapie/masaj
Termen de valabilitate: 3 ani
Serviciu personalizat: etichetă și cutie personalizate sau conform cerințelor dumneavoastră
Certificare: GMPC/FDA/ISO9001/MSDS/COA
-
Ulei esențial de cortex de Magnoliae Officinals 100% pur, natural și organic pentru îngrijirea pielii
Parfumul lui Hou Po este imediat amar și înțepător, apoi se deschide treptat cu o dulceață și o căldură profundă, siropoasă.
Afinitatea lui Hou Po este cu elementele Pământ și Metal, unde căldura sa amară acționează puternic pentru a coborî Qi-ul și a usca umezeala. Datorită acestor calități, este folosit în medicina chineză pentru a ameliora stagnarea și acumularea în tractul digestiv, precum și tusea și respirația șuierătoare cauzate de flegma care obstrucționează plămânii.
Magnolia Officinials este un arbore foios originar din munții și văile din Sichuan, Hubei și alte provincii din China. Scoarța, foarte aromatică, utilizată în medicina tradițională chineză, este îndepărtată de pe tulpini, ramuri și rădăcini și recoltată în perioada aprilie-iunie. Scoarța groasă, netedă, încărcată cu ulei, are o culoare violacee pe partea interioară, cu un luciu cristalin.
Practicanții pot lua în considerare combinarea Hou Po cu uleiul esențial Qing Pi ca un complement de top în amestecuri care vizează descompunerea acumulărilor.
-
Ulei natural de rizoma Macrocephalae, ambalaj personalizat OEM
Ca agent chimioterapeutic eficient, 5-fluorouracilul (5-FU) este utilizat pe scară largă pentru tratamentul tumorilor maligne din tractul gastrointestinal, cap, gât, piept și ovar. Iar 5-FU este medicamentul de primă linie pentru cancerul colorectal în clinică. Mecanismul de acțiune al 5-FU este de a bloca transformarea acidului nucleic uracil în acid nucleic timină în celulele tumorale, apoi afectează sinteza și repararea ADN-ului și ARN-ului pentru a-și obține efectul citotoxic (Afzal et al., 2009; Ducreux et al., 2015; Longley et al., 2003). Cu toate acestea, 5-FU produce și diaree indusă de chimioterapie (CID), una dintre cele mai frecvente reacții adverse care afectează mulți pacienți (Filho et al., 2016). Incidența diareei la pacienții tratați cu 5-FU a fost de până la 50%–80%, ceea ce a afectat serios progresul și eficacitatea chimioterapiei (Iacovelli și colab., 2014; Rosenoff și colab., 2006). Prin urmare, este de o importanță deosebită găsirea unei terapii eficiente pentru diareea indusă de 5-FU.
În prezent, intervențiile non-medicamentoase și intervențiile medicamentoase au fost importate în tratamentul clinic al bolilor inflamatorii din corp (CID). Intervențiile non-medicamentoase includ o dietă rezonabilă și suplimente cu sare, zahăr și alți nutrienți. Medicamente precum loperamida și octreotida sunt utilizate în mod obișnuit în terapia antidiareică a CID (Benson și colab., 2004). În plus, etnomedicamentele sunt, de asemenea, adoptate pentru a trata CID cu propria lor terapie unică în diferite țări. Medicina tradițională chineză (MTC) este o etnomedicină tipică care a fost practicată de mai bine de 2000 de ani în țările din Asia de Est, inclusiv China, Japonia și Coreea (Qi și colab., 2010). MTC susține că medicamentele chimioterapeutice ar declanșa consumul de Qi, deficitul de splină, disarmonia stomacală și umezeala endofitică, rezultând disfuncții conductive ale intestinelor. În teoria MTC, strategia de tratament a CID ar trebui să se bazeze în principal pe suplimentarea Qi-ului și întărirea splinei (Wang și colab., 1994).
Rădăcinile uscate aleAtractylodes macrocephalaKoidz. (AM) șiPanax ginsengCA Mey. (PG) sunt medicamentele pe bază de plante tipice în MTC, cu aceleași efecte de suplimentare a Qi-ului și întărire a splinei (Li și colab., 2014). AM și PG sunt de obicei utilizate ca pereche de plante (cea mai simplă formă de compatibilitate a plantelor chinezești), cu efecte de suplimentare a Qi-ului și întărire a splinei pentru tratarea diareei. De exemplu, AM și PG au fost documentate în formule antidiareice clasice, cum ar fi Shen Ling Bai Zhu San, Si Jun Zi Tang dinTaiping Huimin Heji Ju Fang(Dinastia Song, China) și Bu Zhong Yi Qi Tang dinPi Wei Lun(Dinastia Yuan, China) (Fig. 1). Mai multe studii anterioare au raportat că toate cele trei formule posedă capacitatea de a ameliora bolile infecțioase ale tractului urinar (Bai și colab., 2017; Chen și colab., 2019; Gou și colab., 2016). În plus, studiul nostru anterior a arătat că capsula Shenzhu, care conține doar AM și PG, are efecte potențiale asupra tratamentelor diareei, colitei (sindromul xiexie) și altor boli gastrointestinale (Feng și colab., 2018). Cu toate acestea, niciun studiu nu a discutat efectul și mecanismul AM și PG în tratarea bolilor infecțioase ale tractului urinar, fie în combinație, fie singure.
În prezent, microbiota intestinală este considerată a fi un factor potențial în înțelegerea mecanismului terapeutic al medicinei tradiționale chineze (Feng et al., 2019). Studiile moderne indică faptul că microbiota intestinală joacă un rol crucial în menținerea homeostaziei intestinale. Microbiota intestinală sănătoasă contribuie la protecția mucoasei intestinale, metabolism, homeostazia și răspunsul imun și suprimarea agenților patogeni (Thursby și Juge, 2017; Pickard et al., 2017). Microbiota intestinală dezordonată afectează funcțiile fiziologice și imune ale organismului uman direct sau indirect, inducând reacții adverse precum diareea (Patel et al., 2016; Zhao și Shen, 2010). Cercetările au arătat că 5-FU a modificat remarcabil structura microbiotei intestinale la șoarecii cu diaree (Li et al., 2017). Prin urmare, efectele AM și PM asupra diareei induse de 5-FU pot fi mediate de microbiota intestinală. Cu toate acestea, nu se știe încă dacă AM și PG singure și în combinație ar putea preveni diareea indusă de 5-FU prin modularea microbiotei intestinale.
Pentru a investiga efectele antidiareice și mecanismul care stă la baza AM și PG, am utilizat 5-FU pentru a simula un model diareic la șoareci. Aici, ne-am concentrat pe efectele potențiale ale administrării unice și combinate (AP) aAtractylodes macrocephalaulei esențial (AMO) șiPanax ginsengsaponinele totale (PGS), componentele active extrase respectiv din AM și PG, asupra diareei, patologiei intestinale și structurii microbiene după chimioterapia cu 5-FU.
-
Ulei esențial de Eucommiae Folium 100% pur și natural pentru îngrijirea pielii
Eucommia ulmoides(EU) (numite în mod obișnuit „Du Zhong” în limba chineză) aparțin familiei Eucommiaceae, un gen al arborelui mic originar din China Centrală [1]. Această plantă este cultivată pe scară largă în China datorită importanței sale medicinale. Aproximativ 112 compuși au fost izolați din EU, care includ lignani, iridoizi, fenoli, steroizi și alți compuși. Formula complementară a acestei plante (cum ar fi ceaiul delicios) a demonstrat unele proprietăți medicinale. Frunza de EU are o activitate mai mare legată de cortex, floare și fruct [2,3]. S-a raportat că frunzele de EU îmbunătățesc rezistența oaselor și a mușchilor corpului [4], ducând astfel la longevitate și promovând fertilitatea la oameni [5]. S-a raportat că o formulă delicioasă de ceai obținută din frunze de EU reduce grăsimea și îmbunătățește metabolismul energetic. S-a raportat că compușii flavonoizi (cum ar fi rutina, acidul clorogenic, acidul ferulic și acidul cafeic) prezintă activitate antioxidantă în frunzele de EU [6].
Deși există suficientă literatură despre proprietățile fitochimice ale eucaliptului (EU), au existat totuși puține studii privind proprietățile farmacologice ale diferiților compuși extrași din scoarța, semința, tulpinile și frunzele EU. Această lucrare de sinteză va elucida informații detaliate despre diferiți compuși extrași din diferitele părți (scoarță, semință, tulpină și frunză) ale EU și utilizările prospective ale acestor compuși în ceea ce privește proprietățile de promovare a sănătății, cu dovezi științifice și, prin urmare, va oferi un material de referință pentru aplicarea EU.
-
Ulei pur natural de Houttuynia cordata Ulei de Houttuynia Cordata Ulei de Lchthammolum
În majoritatea țărilor în curs de dezvoltare, 70-95% din populație se bazează pe medicamente tradiționale pentru asistență medicală primară, iar dintre aceștia, 85% dintre oameni folosesc plante sau extractele acestora ca substanță activă.1Căutarea de noi compuși biologic activi din plante depinde de obicei de informațiile specifice etnice și folclorice obținute de la practicienii locali și este încă considerată o sursă importantă pentru descoperirea de medicamente. În India, aproximativ 2000 de medicamente sunt de origine vegetală.2Având în vedere interesul larg manifestat pentru utilizarea plantelor medicinale, prezenta analiză privindHouttuynia cordataThunb. oferă informații actualizate cu referire la studii botanice, comerciale, etnofarmacologice, fitochimice și farmacologice care apar în literatura de specialitate.H. cordataThumb. aparține familieiSaururaceaeși este cunoscută în mod obișnuit sub numele de coadă de șopârlă chinezească. Este o plantă perenă cu rizom stolonifer având două chemotipuri distincte.3,4Chemotipul chinezesc al speciei se găsește în condiții sălbatice și semi-sălbatice în nord-estul Indiei din aprilie până în septembrie.5,6,7]H. cordataeste disponibil în India, în special în valea Brahmaputra din Assam și este utilizat de diverse triburi din Assam sub formă de legume, precum și în diverse scopuri medicinale în mod tradițional.
-
Producător de ulei Arctium lappa 100% pur – Ulei Arctium lappa natural de lime cu certificate de asigurare a calității
Beneficii pentru sănătate
Rădăcina de brusture este adesea consumată, dar poate fi și uscată și infuzată în ceai. Funcționează bine ca sursă de inulină, oprebioticfibre care ajută digestia și îmbunătățesc sănătatea intestinală. În plus, această rădăcină conține flavonoide (nutrienți vegetali),fitochimicaleși antioxidanți despre care se știe că au beneficii pentru sănătate.
În plus, rădăcina de brusture poate oferi și alte beneficii, cum ar fi:
Reduce inflamația cronică Rădăcina de brusture conține o serie de antioxidanți, cum ar fi quercetina, acizii fenolici și luteolină, care pot ajuta la protejarea celulelor de...radicali liberiAcești antioxidanți ajută la reducerea inflamației în tot corpul.
Riscuri pentru sănătate
Rădăcina de brusture este considerată sigură pentru consum sau băut sub formă de ceai. Cu toate acestea, această plantă seamănă foarte mult cu plantele de belladonna, care sunt toxice. Se recomandă cumpărarea rădăcinii de brusture doar de la vânzători de încredere și evitarea colectării acesteia pe cont propriu. În plus, există puține informații despre efectele sale asupra copiilor sau femeilor însărcinate. Discutați cu medicul dumneavoastră înainte de a utiliza rădăcina de brusture la copii sau dacă sunteți însărcinată.
Iată câteva alte riscuri posibile pentru sănătate de luat în considerare dacă utilizați rădăcină de brusture:
Deshidratare crescută
Rădăcina de brusture acționează ca un diuretic natural, ceea ce poate duce la deshidratare. Dacă luați pastile pentru eliminarea apei sau alte diuretice, nu ar trebui să luați rădăcină de brusture. Dacă luați aceste medicamente, este important să fiți conștienți de alte medicamente, plante medicinale și ingrediente care pot duce la deshidratare.
Reacție alergică
Dacă sunteți sensibil sau aveți antecedente de reacții alergice la margarete, ambrozie sau crizanteme, aveți un risc crescut de a avea o reacție alergică la rădăcina de brusture.
-
Preț en-gros vrac 100% ulei pur AsariRadix Et Rhizoma Aromaterapie relaxantă Eucalyptus globulus
Studiile pe animale și in vitro au investigat potențialele efecte antifungice, antiinflamatorii și cardiovasculare ale sasafrasului și componentelor sale. Cu toate acestea, studiile clinice sunt insuficiente, iar sasafrasul nu este considerat sigur pentru utilizare. Safrolul, principalul constituent al scoarței și uleiului de rădăcină de sasafras, a fost interzis de Administrația pentru Alimente și Medicamente din SUA (FDA), inclusiv pentru utilizare ca aromă sau parfum, și nu ar trebui utilizat intern sau extern, deoarece este potențial cancerigen. Safrolul a fost utilizat în producția ilegală de 3,4-metilen-dioximetamfetamină (MDMA), cunoscută și sub denumirile „ecstasy” sau „Molly”, iar vânzarea de safrol și ulei de sasafras este monitorizată de Administrația pentru Controlul Drogurilor din SUA.
-
Preț en-gros vrac ulei esențial 100% pur Stellariae Radix (nou) Relax Aromatherapy Eucalyptus globulus
Farmacopeea chineză (ediția din 2020) prevede ca extractul metanolic al YCH să nu fie mai mic de 20,0% [2], fără a fi specificați alți indicatori de evaluare a calității. Rezultatele acestui studiu arată că atât conținutul extractelor de metanol din probele sălbatice, cât și din cele cultivate a îndeplinit standardul farmacopeei și nu a existat nicio diferență semnificativă între acestea. Prin urmare, nu a existat nicio diferență aparentă de calitate între probele sălbatice și cele cultivate, conform acestui indice. Cu toate acestea, conținutul de steroli totali și flavonoide totale din probele sălbatice a fost semnificativ mai mare decât cel din probele cultivate. Analizele metabolomice ulterioare au relevat o diversitate abundentă de metaboliți între probele sălbatice și cele cultivate. În plus, au fost eliminați 97 de metaboliți semnificativ diferiți, care sunt enumerați înTabel suplimentar S2Printre acești metaboliți semnificativ diferiți se numără β-sitosterolul (ID este M397T42) și derivații de quercetină (M447T204_2), care au fost raportați ca fiind ingrediente active. Constituenți neraportați anterior, cum ar fi trigonelina (M138T291_2), betaina (M118T277_2), fustina (M269T36), rotenona (M241T189), arctiina (M557T165) și acidul loganic (M399T284_2), au fost, de asemenea, incluși printre metaboliții diferențiali. Aceste componente joacă diverse roluri în antioxidant, antiinflamator, eliminarea radicalilor liberi, anticancerigen și tratarea aterosclerozei și, prin urmare, ar putea constitui potențiale componente active noi în YCH. Conținutul de ingrediente active determină eficacitatea și calitatea materialelor medicinale [7]. În concluzie, extractul de metanol, ca singur indice de evaluare a calității YCH, are unele limitări, iar markeri de calitate mai specifici trebuie explorați în continuare. Au existat diferențe semnificative în ceea ce privește sterolii totali, flavonoizii totali și conținutul multor alți metaboliți diferențiali între YCH sălbatic și cel cultivat; prin urmare, au existat potențial unele diferențe de calitate între acestea. În același timp, ingredientele active potențiale recent descoperite în YCH ar putea avea o valoare de referință importantă pentru studiul bazei funcționale a YCH și dezvoltarea ulterioară a resurselor YCH.
Importanța materialelor medicinale autentice a fost recunoscută de mult timp în regiunea de origine specifică pentru producerea de medicamente chinezești pe bază de plante de o calitate excelentă.8]. Calitatea înaltă este un atribut esențial al materialelor medicinale autentice, iar habitatul este un factor important care afectează calitatea acestor materiale. Încă de când YCH a început să fie utilizat ca medicament, acesta a fost mult timp dominat de YCH sălbatic. În urma introducerii și domesticirii cu succes a YCH în Ningxia în anii 1980, sursa materialelor medicinale Yinchaihu s-a schimbat treptat de la YCH sălbatic la YCH cultivat. Conform unei investigații anterioare asupra surselor de YCH [9] și investigațiile de teren ale grupului nostru de cercetare au arătat diferențe semnificative în zonele de distribuție ale materialelor medicinale cultivate și sălbatice. YCH sălbatic este distribuit în principal în Regiunea Autonomă Ningxia Hui din provincia Shaanxi, adiacentă zonei aride a Mongoliei Interioare și centrului Ningxia. În special, stepa deșertică din aceste zone este cel mai potrivit habitat pentru creșterea YCH. În schimb, YCH cultivat este distribuit în principal la sud de zona de distribuție sălbatică, cum ar fi județul Tongxin (Cultivat I) și zonele înconjurătoare, care a devenit cea mai mare bază de cultivare și producție din China, și județul Pengyang (Cultivat II), care este situat într-o zonă mai sudică și este o altă zonă producătoare de YCH cultivat. Mai mult, habitatele celor două zone cultivate menționate mai sus nu sunt stepe deșertice. Prin urmare, pe lângă modul de producție, există și diferențe semnificative în habitatul YCH sălbatic și cultivat. Habitatul este un factor important care afectează calitatea materialelor medicinale pe bază de plante. Diferite habitate vor afecta formarea și acumularea metaboliților secundari în plante, afectând astfel calitatea produselor medicinale [10,11]. Prin urmare, diferențele semnificative în conținutul de flavonoide totale și steroli totali, precum și expresia celor 53 de metaboliți pe care i-am găsit în acest studiu, ar putea fi rezultatul diferențelor de gestionare a terenurilor și de habitat.Una dintre principalele modalități prin care mediul influențează calitatea materialelor medicinale este prin exercitarea stresului asupra plantelor sursă. Stresul moderat al mediului tinde să stimuleze acumularea de metaboliți secundari [12,13]. Ipoteza echilibrului creștere/diferențiere afirmă că, atunci când nutrienții sunt suficient de disponibili, plantele cresc în principal, în timp ce atunci când nutrienții sunt deficitari, plantele se diferențiază în principal și produc mai mulți metaboliți secundari [14]. Stresul cauzat de deficitul de apă este principalul stres de mediu cu care se confruntă plantele din zonele aride. În acest studiu, starea apei în YCH cultivat este mai abundentă, cu niveluri anuale de precipitații semnificativ mai mari decât cele pentru YCH sălbatic (rezerva de apă pentru Cultivat I a fost de aproximativ 2 ori mai mare decât cea pentru Sălbatic; Cultivat II a fost de aproximativ 3,5 ori mai mare decât cea pentru Sălbatic). În plus, solul din mediul sălbatic este nisipos, dar solul din terenurile agricole este argilos. Comparativ cu argila, solul nisipos are o capacitate slabă de retenție a apei și este mai probabil să agraveze stresul cauzat de secetă. În același timp, procesul de cultivare a fost adesea însoțit de udare, astfel încât gradul de stres cauzat de secetă a fost scăzut. YCH sălbatic crește în habitate aride naturale dure și, prin urmare, poate suferi un stres cauzat de secetă mai sever.Osmoreglarea este un mecanism fiziologic important prin care plantele fac față stresului cauzat de secetă, iar alcaloizii sunt regulatori osmotici importanți la plantele superioare.15]. Betainele sunt compuși alcaloizi cuaternari de amoniu solubili în apă și pot acționa ca osmoprotectori. Stresul secetos poate reduce potențialul osmotic al celulelor, în timp ce osmoprotectorii păstrează și mențin structura și integritatea macromoleculelor biologice și atenuează eficient daunele cauzate de stresul secetos asupra plantelor [16]. De exemplu, în condiții de stres cauzat de secetă, conținutul de betaină din sfecla de zahăr și Lycium barbarum a crescut semnificativ [17,18]. Trigonelina este un regulator al creșterii celulare și, în condiții de stres secetos, poate prelungi durata ciclului celular al plantei, poate inhiba creșterea celulară și poate duce la micșorarea volumului celular. Creșterea relativă a concentrației de solut în celulă permite plantei să realizeze reglarea osmotică și să își sporească capacitatea de a rezista la stresul secetos [19]. JIA X [20] a constatat că, odată cu creșterea stresului cauzat de secetă, Astragalus membranaceus (o sursă din medicina tradițională chineză) a produs mai multă trigonelină, care acționează pentru a regla potențialul osmotic și a îmbunătăți capacitatea de a rezista la stresul cauzat de secetă. De asemenea, s-a demonstrat că flavonoidele joacă un rol important în rezistența plantelor la stresul cauzat de secetă [21,22]. Un număr mare de studii au confirmat că stresul moderat cauzat de secetă a fost favorabil acumulării de flavonoide. Lang Duo-Yong și colab. [23] au comparat efectele stresului cauzat de secetă asupra YCH prin controlul capacității de reținere a apei în câmp. S-a constatat că stresul cauzat de secetă a inhibat creșterea rădăcinilor într-o oarecare măsură, dar în situații de stres cauzat de secetă moderat și sever (40% din capacitatea de reținere a apei în câmp), conținutul total de flavonoide din YCH a crescut. Între timp, în condiții de stres cauzat de secetă, fitosterolii pot acționa pentru a regla fluiditatea și permeabilitatea membranei celulare, a inhiba pierderea de apă și a îmbunătăți rezistența la stres [24,25]. Prin urmare, acumularea crescută de flavonoide totale, steroli totali, betaină, trigonelină și alți metaboliți secundari în YCH sălbatic ar putea fi legată de stresul cauzat de secetă de intensitate ridicată.În acest studiu, s-a efectuat o analiză de îmbogățire a căii KEGG asupra metaboliților care s-au dovedit a fi semnificativ diferiți între YCH sălbatic și cel cultivat. Metaboliții îmbogățiți i-au inclus pe cei implicați în căile metabolismului ascorbatului și aldaratului, biosintezei aminoacil-ARNt, metabolismului histidinei și metabolismului beta-alaninei. Aceste căi metabolice sunt strâns legate de mecanismele de rezistență la stres ale plantelor. Printre acestea, metabolismul ascorbatului joacă un rol important în producția de antioxidanți ai plantelor, metabolismul carbonului și azotului, rezistența la stres și alte funcții fiziologice.26]; biosinteza aminoacil-ARNt este o cale importantă pentru formarea proteinelor [27,28], care este implicată în sinteza proteinelor rezistente la stres. Atât căile histidinei, cât și cele ale β-alaninei pot spori toleranța plantelor la stresul din mediu [29,30]. Acest lucru indică în plus că diferențele de metaboliți dintre YCH sălbatic și cel cultivat au fost strâns legate de procesele de rezistență la stres.Solul este baza materială pentru creșterea și dezvoltarea plantelor medicinale. Azotul (N), fosforul (P) și potasiul (K) din sol sunt elemente nutritive importante pentru creșterea și dezvoltarea plantelor. Materia organică din sol conține, de asemenea, N, P, K, Zn, Ca, Mg și alte macroelemente și oligoelemente necesare plantelor medicinale. Excesul sau deficitul de nutrienți sau raporturile dezechilibrate de nutrienți vor afecta creșterea și dezvoltarea, precum și calitatea plantelor medicinale, iar diferite plante au cerințe nutriționale diferite.31,32,33]. De exemplu, un stres scăzut de N a promovat sinteza alcaloizilor la Isatis indigotica și a fost benefic pentru acumularea de flavonoide la plante precum Tetrastigma hemsleyanum, Crataegus pinnatifida Bunge și Dichondra repens Forst. În schimb, prea mult N a inhibat acumularea de flavonoide la specii precum Erigeron breviscapus, Abrus cantoniensis și Ginkgo biloba și a afectat calitatea materialelor medicinale [34]. Aplicarea îngrășământului cu fosfor a fost eficientă în creșterea conținutului de acid glicirizic și dihidroacetonă din lemnul dulce din Ural [35]. Când cantitatea aplicată a depășit 0,12 kg·m−2, conținutul total de flavonoide din Tussilago farfara a scăzut [36]. Aplicarea unui îngrășământ cu fosfor a avut un efect negativ asupra conținutului de polizaharide din rizoma polygonati din medicina tradițională chineză [37], dar un îngrășământ cu K a fost eficient în creșterea conținutului său de saponine [38]. Aplicarea unui îngrășământ de 450 kg·hm−2 K a fost cea mai bună opțiune pentru creșterea și acumularea de saponine la Panax notoginseng în vârstă de doi ani [39]. În raportul N:P:K = 2:2:1, cantitățile totale de extract hidrotermal, harpagidă și harpagozidă au fost cele mai mari [40]. Raportul ridicat de N, P și K a fost benefic pentru promovarea creșterii Pogostemon cablin și creșterea conținutului de ulei volatil. Un raport scăzut de N, P și K a crescut conținutul principalelor componente eficiente ale uleiului din frunzele de tulpină de Pogostemon cablin [41]. YCH este o plantă tolerantă la soluri sterile și ar putea avea cerințe specifice pentru nutrienți precum N, P și K. În acest studiu, comparativ cu YCH cultivat, solul plantelor YCH sălbatice a fost relativ steril: conținutul de materie organică, N total, P total și K total din sol a fost de aproximativ 1/10, 1/2, 1/3 și respectiv 1/3 din cel al plantelor cultivate. Prin urmare, diferențele de nutrienți din sol ar putea fi un alt motiv pentru diferențele dintre metaboliții detectați în YCH cultivat și sălbatic. Weibao Ma și colab. [42] a constatat că aplicarea unei anumite cantități de îngrășământ cu N și îngrășământ cu P a îmbunătățit semnificativ randamentul și calitatea semințelor. Cu toate acestea, efectul elementelor nutritive asupra calității YCH nu este clar, iar măsurile de fertilizare pentru îmbunătățirea calității materialelor medicinale necesită studii suplimentare.Medicamentele chinezești din plante au caracteristicile: „Habitatele favorabile promovează randamentul, iar habitatele nefavorabile îmbunătățesc calitatea”.43]. În procesul de trecere treptată de la YCH sălbatic la cel cultivat, habitatul plantelor s-a schimbat de la stepa deșertică aridă și sterilă la terenuri agricole fertile cu apă mai abundentă. Habitatul YCH cultivat este superior, iar randamentul este mai mare, ceea ce este util pentru a satisface cererea pieței. Cu toate acestea, acest habitat superior a dus la modificări semnificative ale metaboliților YCH; va fi nevoie de cercetări suplimentare pentru a stabili dacă acest lucru este propice îmbunătățirii calității YCH și cum se poate obține o producție de înaltă calitate a YCH prin măsuri de cultivare bazate pe dovezi științifice.Cultivarea simulativă a habitatului este o metodă de simulare a habitatului și a condițiilor de mediu ale plantelor medicinale sălbatice, bazată pe cunoașterea adaptării pe termen lung a plantelor la stresuri specifice de mediu.43]. Prin simularea diverșilor factori de mediu care afectează plantele sălbatice, în special habitatul original al plantelor utilizate ca surse de materiale medicinale autentice, abordarea utilizează designul științific și intervenția umană inovatoare pentru a echilibra creșterea și metabolismul secundar al plantelor medicinale chinezești [43]. Metodele își propun să obțină aranjamente optime pentru dezvoltarea de materiale medicinale de înaltă calitate. Cultivarea simulativă a habitatului ar trebui să ofere o modalitate eficientă pentru producția de înaltă calitate a YCH, chiar și atunci când baza farmacodinamică, markerii de calitate și mecanismele de răspuns la factorii de mediu sunt neclare. În consecință, sugerăm ca măsurile științifice de proiectare și gestionare a terenurilor în cultivarea și producția de YCH să fie efectuate ținând cont de caracteristicile de mediu ale YCH sălbatice, cum ar fi condițiile de sol arid, steril și nisipos. În același timp, se speră, de asemenea, că cercetătorii vor efectua cercetări mai aprofundate asupra bazei materialelor funcționale și a markerii de calitate ai YCH. Aceste studii pot oferi criterii de evaluare mai eficiente pentru YCH și pot promova producția de înaltă calitate și dezvoltarea durabilă a industriei. -
Ulei esențial Fructus Amomi din plante, difuzoare naturale pentru masaj, 1 kg, vrac, Amomum villosum
Familia Zingiberaceae a atras o atenție tot mai mare în cercetarea alelopatică datorită bogatei sale în uleiuri volatile și aromaticității speciilor sale. Cercetările anterioare au arătat că substanțele chimice din Curcuma zedoaria (zedoaria) [40], Alpinia zerumbet (Pers.) BBLurtt și RMSm. [41] și Zingiber officinale Rosc. [42] din familia ghimbirului au efecte alelopatice asupra germinării semințelor și creșterii răsadurilor de porumb, salată verde și roșii. Studiul nostru actual este primul raport privind activitatea alelopatică a substanțelor volatile din tulpini, frunze și fructe tinere de A. villosum (un membru al familiei Zingiberaceae). Randamentul de ulei din tulpini, frunze și fructe tinere a fost de 0,15%, 0,40% și respectiv 0,50%, indicând faptul că fructele au produs o cantitate mai mare de uleiuri volatile decât tulpinile și frunzele. Principalele componente ale uleiurilor volatile din tulpini au fost β-pinenul, β-felandrenul și α-pinenul, un model similar cu cel al principalelor substanțe chimice din uleiul de frunze, β-pinenul și α-pinenul (hidrocarburi monoterpenice). Pe de altă parte, uleiul din fructele tinere era bogat în acetat de bornil și camfor (monoterpene oxigenate). Rezultatele au fost susținute de descoperirile lui Do N Dai [30,32] și Hui Ao [31] care identificaseră uleiurile din diferite organe ale lui A. villosum.
Au existat mai multe rapoarte privind activitățile inhibitoare ale creșterii plantelor ale acestor compuși principali la alte specii. Shalinder Kaur a descoperit că α-pinenul din eucalipt a suprimat în mod pronunțat lungimea rădăcinii și înălțimea lăstarilor de Amaranthus viridis L. la o concentrație de 1,0 μL [43], iar un alt studiu a arătat că α-pinena a inhibat creșterea timpurie a rădăcinilor și a provocat leziuni oxidative în țesutul radicular prin generarea crescută de specii reactive de oxigen [44]. Unele rapoarte au susținut că β-pinena a inhibat germinarea și creșterea răsadurilor buruienilor testate într-o manieră dependentă de doză, prin perturbarea integrității membranei [45], modificând biochimia plantelor și sporind activitățile peroxidazelor și polifenol oxidazelor [46]. β-felandrenul a demonstrat o inhibare maximă a germinării și creșterii Vigna unguiculata (L.) Walp la o concentrație de 600 ppm [47], în timp ce, la o concentrație de 250 mg/m3, camforul a suprimat creșterea radiculei și a lăstarilor de Lepidium sativum L. [48]. Cu toate acestea, cercetările care raportează efectul alelopatic al acetatului de bornil sunt insuficiente. În studiul nostru, efectele alelopatice ale β-pinenului, acetatului de bornil și camforului asupra lungimii rădăcinii au fost mai slabe decât în cazul uleiurilor volatile, cu excepția α-pinenului, în timp ce uleiul din frunze, bogat în α-pinen, a fost, de asemenea, mai fitotoxic decât uleiurile volatile corespunzătoare din tulpinile și fructele de A. villosum, ambele constatări indicând faptul că α-pinenul ar putea fi substanța chimică importantă pentru alelopatia acestei specii. În același timp, rezultatele au sugerat, de asemenea, că unii compuși din uleiul din fructe care nu erau abundenți ar putea contribui la producerea efectului fitotoxic, o constatare care necesită cercetări suplimentare în viitor.În condiții normale, efectul alelopatic al substanțelor alelochimice este specific speciei. Jiang și colab. au descoperit că uleiul esențial produs de Artemisia sieversiana a exercitat un efect mai puternic asupra Amaranthus retroflexus L. decât asupra Medicago sativa L., Poa annua L. și Pennisetum alopecuroides (L.) Spreng. [49]. Într-un alt studiu, uleiul volatil de Lavandula angustifolia Mill. a produs diferite grade de efecte fitotoxice asupra diferitelor specii de plante. Lolium multiflorum Lam. a fost cea mai sensibilă specie acceptoare, creșterea hipocotilului și a radiculei fiind inhibată cu 87,8%, respectiv 76,7%, la o doză de 1 μL/mL uleiuri, însă creșterea hipocotilului la răsadurile de castravete a fost abia afectată [20]. Rezultatele noastre au arătat, de asemenea, o diferență în sensibilitatea la substanțele volatile ale speciei A. villosum între L. sativa și L. perenne.Compușii volatili și uleiurile esențiale ale aceleiași specii pot varia cantitativ și/sau calitativ din cauza condițiilor de creștere, a părților plantei și a metodelor de detectare. De exemplu, un raport a demonstrat că piranoidul (10,3%) și β-cariofilena (6,6%) au fost principalii compuși volatili emiși din frunzele de Sambucus nigra, în timp ce benzaldehida (17,8%), α-bulnesenul (16,6%) și tetracosana (11,5%) au fost abundente în uleiurile extrase din frunze [50]. În studiul nostru, compușii volatili eliberați de materialele vegetale proaspete au avut efecte alelopatice mai puternice asupra plantelor testate decât uleiurile volatile extrase, diferențele de răspuns fiind strâns legate de diferențele dintre substanțele alelochimice prezente în cele două preparate. Diferențele exacte dintre compușii volatili și uleiuri trebuie investigate în continuare în experimentele ulterioare.Diferențele în diversitatea microbiană și structura comunității microbiene din probele de sol în care s-au adăugat uleiuri volatile au fost legate de competiția dintre microorganisme, precum și de orice efecte toxice și durata prezenței uleiurilor volatile în sol. Vokou și Liotiri [51] a constatat că aplicarea a patru uleiuri esențiale (0,1 mL) pe solul cultivat (150 g) a activat respirația probelor de sol, chiar dacă uleiurile au diferit în ceea ce privește compoziția lor chimică, sugerând că uleiurile vegetale sunt utilizate ca sursă de carbon și energie de către microorganismele din sol. Datele obținute din studiul actual au confirmat că uleiurile din întreaga plantă de A. villosum au contribuit la creșterea evidentă a numărului de specii fungice din sol până în a 14-a zi după adăugarea uleiului, indicând faptul că uleiul poate furniza sursa de carbon pentru mai multe ciuperci din sol. Un alt studiu a raportat o constatare: microorganismele din sol și-au recuperat funcția și biomasa inițială după o perioadă temporară de variație indusă de adăugarea uleiului de Thymbra capitata L. (Cav), dar uleiul la cea mai mare doză (0,93 µL ulei per gram de sol) nu a permis microorganismelor din sol să își recupereze funcționalitatea inițială [52]. În studiul actual, pe baza analizei microbiologice a solului după ce a fost tratat cu diferite zile și concentrații, am speculat că comunitatea bacteriană din sol se va recupera după mai multe zile. În schimb, microbiota fungică nu poate reveni la starea inițială. Următoarele rezultate confirmă această ipoteză: efectul distinct al concentrației ridicate de ulei asupra compoziției microbiomului fungic din sol a fost relevat prin analiza coordonatelor principale (PCoA), iar prezentările hărții termice au confirmat din nou că, la nivel de gen, compoziția comunității fungice a solului tratat cu 3,0 mg/mL ulei (și anume 0,375 mg ulei per gram de sol) a diferit considerabil de celelalte tratamente. În prezent, cercetările privind efectele adăugării de hidrocarburi monoterpenice sau monoterpene oxigenate asupra diversității microbiene a solului și structurii comunității sunt încă rare. Câteva studii au raportat că α-pinenul a crescut activitatea microbiană a solului și abundența relativă a Methylophilaceae (un grup de metilotrofe, Proteobacteria) în condiții de conținut scăzut de umiditate, jucând un rol important ca sursă de carbon în solurile mai uscate [53]. În mod similar, uleiul volatil din planta întreagă A. villosum, care conține 15,03% α-pinen (Tabel suplimentar S1), a crescut evident abundența relativă a Proteobacteriilor la 1,5 mg/mL și 3,0 mg/mL, ceea ce a sugerat că α-pinenul ar putea acționa ca una dintre sursele de carbon pentru microorganismele din sol.Compușii volatili produși de diferite organe ale plantei A. villosum au avut diferite grade de efecte alelopatice asupra L. sativa și L. perenne, ceea ce a fost strâns legat de constituenții chimici pe care îi conțineau părțile plantei A. villosum. Deși compoziția chimică a uleiului volatil a fost confirmată, compușii volatili eliberați de A. villosum la temperatura camerei sunt necunoscuți și necesită investigații suplimentare. Mai mult, efectul sinergic dintre diferite substanțe alelochimice este, de asemenea, demn de luat în considerare. În ceea ce privește microorganismele din sol, pentru a explora în mod cuprinzător efectul uleiului volatil asupra microorganismelor din sol, trebuie să efectuăm în continuare cercetări mai aprofundate: să extindem timpul de tratament cu uleiul volatil și să identificăm variațiile compoziției chimice a uleiului volatil din sol în diferite zile. -
Ulei pur de Artemisia capillaris pentru fabricarea lumânărilor și săpunurilor, ulei esențial de difuzor en-gros, nou pentru difuzoare cu arzător cu stuf
Proiectarea modelului de rozătoare
Animalele au fost împărțite aleatoriu în cinci grupuri de câte cincisprezece șoareci fiecare. Șoarecii din grupul de control și din grupul model au fost gavați cuulei de susantimp de 6 zile. Șoarecii din grupul de control pozitiv au fost gavați cu comprimate de bifendat (BT, 10 mg/kg) timp de 6 zile. Grupurile experimentale au fost tratate cu 100 mg/kg și 50 mg/kg AEO dizolvat în ulei de susan timp de 6 zile. În ziua 6, grupul de control a fost tratat cu ulei de susan, iar toate celelalte grupuri au fost tratate cu o singură doză de CCl4 0,2% în ulei de susan (10 ml/kg) prininjecție intraperitonealăȘoarecii au fost apoi ținuți în repaus alimentar fără apă, iar probele de sânge au fost colectate din vasele retrobulbare; sângele colectat a fost centrifugat la 3000 ×gtimp de 10 minute pentru a separa serul.Luxație cervicalăa fost efectuată imediat după recoltarea de sânge, iar probele de ficat au fost prelevate prompt. O parte din proba de ficat a fost imediat depozitată la −20 °C până la analiză, iar o altă parte a fost excizată și fixată într-un recipient cu 10%.formolsoluție; țesuturile rămase au fost depozitate la −80 °C pentru analiza histopatologică (Wang și colab., 2008,Hsu și colab., 2009,Nie și colab., 2015).
Măsurarea parametrilor biochimici din ser
Leziunea hepatică a fost evaluată prin estimareaactivități enzimaticea ALT și AST serice utilizând kituri comerciale corespunzătoare, conform instrucțiunilor pentru kituri (Nanjing, provincia Jiangsu, China). Activitățile enzimatice au fost exprimate în unități per litru (U/l).
Măsurarea MDA, SOD, GSH și GSH-Pxîn omogenate hepatice
Țesuturile hepatice au fost omogenizate cu soluție salină fiziologică rece într-un raport de 1:9 (g/v, ficat:soluție salină). Homogenatele au fost centrifugate (2500 × 2500).gtimp de 10 minute) pentru a colecta supernatantele pentru determinările ulterioare. Afectarea hepatică a fost evaluată conform măsurătorilor hepatice ale nivelurilor de MDA și GSH, precum și ale SOD și GSH-Pxactivități. Toate acestea au fost determinate urmând instrucțiunile de pe kit (Nanjing, provincia Jiangsu, China). Rezultatele pentru MDA și GSH au fost exprimate în nmol per mg de proteină (nmol/mg prot), iar activitățile SOD și GSH-Pxau fost exprimate ca U per mg de proteină (U/mg prot).
Analiza histopatologică
Porțiuni de ficat proaspăt obținut au fost fixate într-o soluție tamponată 10%.paraformaldehidăsoluție de fosfat. Proba a fost apoi încorporată în parafină, tăiată în secțiuni de 3–5 μm, colorată cuhematoxilinăşieozină(H&E) conform unei proceduri standard și, în final, analizate prinmicroscopie optică(Tian și colab., 2012).
Analiza statistică
Rezultatele au fost exprimate ca medie ± deviație standard (DS). Rezultatele au fost analizate utilizând programul statistic SPSS Statistics, versiunea 19.0. Datele au fost supuse unei analize a varianței (ANOVA,p< 0,05) urmată de testul Dunnett și testul Dunnett T3 pentru a determina diferențele semnificative statistic între valorile diferitelor grupuri experimentale. O diferență semnificativă a fost considerată la un nivel dep< 0,05.
Rezultate și discuții
Componentele AEO
În urma analizei GC/MS, s-a constatat că AEO conține 25 de constituenți eluați între 10 și 35 de minute și s-au identificat 21 de constituenți care reprezintă 84% din uleiul esențial.Tabelul 1). Uleiul volatil conținutmonoterpenoide(80,9%), sescviterpenoide (9,5%), hidrocarburi saturate neramificate (4,86%) și diverse acetilene (4,86%). Comparativ cu alte studii (Guo și colab., 2004), am găsit monoterpenoizi abundenți (80,90%) în AEO. Rezultatele au arătat că cel mai abundent constituent al AEO este β-citronelolul (16,23%). Alte componente majore ale AEO includ 1,8-cineolul (13,9%),camfor(12,59%),linalool(11,33%), α-pinenă (7,21%), β-pinenă (3,99%),timol(3,22%), șimircen(2,02%). Variația compoziției chimice poate fi legată de condițiile de mediu la care a fost expusă planta, cum ar fi apa minerală, lumina soarelui, stadiul de dezvoltare șinutriţie.
-
Ulei pur de Saposhnikovia divaricata pentru fabricarea lumânărilor și săpunurilor, ulei esențial de difuzor en-gros, nou pentru difuzoare cu arzător cu stuf
2.1. Pregătirea SDE
Rizomii de SD au fost achiziționați sub formă de plantă uscată de la Hanherb Co. (Guri, Coreea). Materialele vegetale au fost confirmate taxonomic de Dr. Go-Ya Choi de la Institutul Coreean de Medicină Orientală (KIOM). Un specimen justificativ (numărul 2014 SDE-6) a fost depus în Herbarul Coreean de Resurse Standard din Plante Medicinale. Rizomii uscați de SD (320 g) au fost extrași de două ori cu etanol 70% (cu reflux de 2 ore), iar extractul a fost apoi concentrat sub presiune redusă. Decoctul a fost filtrat, liofilizat și depozitat la 4°C. Randamentul extractului uscat din materiile prime brute a fost de 48,13% (g/g).
2.2. Analiza cantitativă prin cromatografie lichidă de înaltă performanță (HPLC)
Analiza cromatografică a fost efectuată cu un sistem HPLC (Waters Co., Milford, MA, SUA) și un detector cu matrice de fotodiode. Pentru analiza HPLC a SDE, principalul-OStandardul de glucozilcimifugină a fost achiziționat de la Institutul Coreean de Promovare a Industriei Medicinii Tradiționale (Gyeongsan, Coreea) șisec-O-glucozilhamaudol și 4′-O-β-D-glucozil-5-O-metilvisaminolul a fost izolat în laboratorul nostru și identificat prin analize spectrale, în principal prin RMN și MS.
Probele SDE (0,1 mg) au fost dizolvate în etanol 70% (10 mL). Separarea cromatografică a fost efectuată cu o coloană XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, SUA). Faza mobilă a constat din acetonitril (A) și acid acetic 0,1% în apă (B) la un debit de 1,0 mL/min. S-a utilizat un program cu gradient în mai multe etape, după cum urmează: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) și 20–65% A (23–40 min). Lungimea de undă de detecție a fost scanată la 210–400 nm și înregistrată la 254 nm. Volumul injectat a fost de 10,0μL. Soluțiile standard pentru determinarea a trei cromone au fost preparate la o concentrație finală de 7,781 mg/mL (prim-O-glucozilcimifugină), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glucozil-5-O-metilvisaminol) și 31,125 mg/ml (sec-O-glucozilhamaudol) în metanol și păstrat la 4°C.
2.3. Evaluarea activității antiinflamatoriiIn vitro
2.3.1. Cultura celulară și tratarea probelor
Celulele RAW 264.7 au fost obținute de la American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, SUA) și cultivate în mediu DMEM conținând 1% antibiotice și 5,5% FBS. Celulele au fost incubate într-o atmosferă umidificată cu 5% CO2 la 37°C. Pentru a stimula celulele, mediul a fost înlocuit cu mediu DMEM proaspăt și lipopolizaharidă (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, SUA) la 1°C.μg/mL a fost adăugat în prezența sau absența SDE (200 sau 400μg/ml) pentru încă 24 de ore.
2.3.2. Determinarea oxidului nitric (NO), prostaglandinei E2 (PGE2), factorului de necroză tumorală -α(TNF-α) și producția de interleukină-6 (IL-6)
Celulele au fost tratate cu SDE și stimulate cu LPS timp de 24 de ore. Producția de NO a fost analizată prin măsurarea nitriților folosind reactivul Griess, conform unui studiu anterior [12]. Secreția citokinelor inflamatorii PGE2, TNF-α... și IL-6 a fost determinată utilizând un kit ELISA (sisteme R&D), conform instrucțiunilor producătorului. Efectele SDE asupra producției de NO și citokine au fost determinate la 540 nm sau 450 nm utilizând un aparat Wallac EnVision.™cititor de microplăci (PerkinElmer).
2.4. Evaluarea activității antiosteoartriticeIn vivo
2.4.1. Animale
Șobolanii Sprague-Dawley masculi (în vârstă de 7 săptămâni) au fost achiziționați de la Samtako Inc. (Osan, Coreea) și adăpostiți în condiții controlate, cu un ciclu lumină/întuneric de 12 ore la°C și% umiditate. Șobolanilor li s-a administrat o dietă de laborator și apăla discrețieToate procedurile experimentale au fost efectuate în conformitate cu ghidurile Institutului Național de Sănătate (NIH) și aprobate de Comitetul pentru Îngrijirea și Utilizarea Animalelor al Universității Daejeon (Daejeon, Republica Coreea).
2.4.2. Inducerea OA cu MIA la șobolani
Animalele au fost randomizate și repartizate în grupuri de tratament înainte de începerea studiului ((per grup). Soluție MIA (3 mg/50μL (soluție salină 0,9%) a fost injectat direct în spațiul intraarticular al genunchiului drept sub anestezie indusă cu un amestec de ketamină și xilazină. Șobolanii au fost împărțiți aleatoriu în patru grupe: (1) grupul salin fără injecție cu MIA, (2) grupul cu MIA cu injecție cu MIA, (3) grupul tratat cu SDE (200 mg/kg) cu injecție cu MIA și (4) grupul tratat cu indometacină (IM) (2 mg/kg) cu injecție cu MIA. Șobolanilor li s-a administrat oral SDE și IM cu 1 săptămână înainte de injecția cu MIA, timp de 4 săptămâni. Dozajul de SDE și IM utilizat în acest studiu s-a bazat pe cel utilizat în studiile anterioare [10,13,14].
2.4.3. Măsurători ale distribuției suportului de greutate la nivelul labei posterioare
După inducerea OA, echilibrul inițial al capacității portante a labelor posterioare a fost perturbat. Un tester de incapacitate (Linton instrumentation, Norfolk, Marea Britanie) a fost utilizat pentru a evalua modificările toleranței portante. Șobolanii au fost plasați cu grijă în camera de măsurare. Forța portantă exercitată de membrul posterior a fost mediată pe o perioadă de 3 secunde. Raportul de distribuție a greutății a fost calculat cu următoarea ecuație: [greutatea pe membrul posterior drept/(greutatea pe membrul posterior drept + greutatea pe membrul posterior stâng)] × 100 [15].
2.4.4. Măsurători ale nivelurilor serice de citokine
Probele de sânge au fost centrifugate la 1.500 g timp de 10 minute la 4°C; apoi serul a fost colectat și păstrat la −70°C până la utilizare. Nivelurile de IL-1β, IL-6, TNF-α...și PGE2 din ser au fost măsurate utilizând kituri ELISA de la R&D Systems (Minneapolis, MN, SUA), conform instrucțiunilor producătorului.
2.4.5. Analiză RT-PCR cantitativă în timp real
ARN-ul total a fost extras din țesutul articulației genunchiului folosind reactivul TRI® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SUA), transcris invers în ADNc și amplificat prin PCR folosind un kit TM One Step RT PCR cu SYBR green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, SUA). PCR cantitativ în timp real a fost efectuat folosind sistemul Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, SUA). Secvențele primerilor și secvența sondei sunt prezentate în Tabelul1Alicote de ADNc din probă și o cantitate egală de ADNc GAPDH au fost amplificate cu amestecul principal TaqMan® Universal PCR care conține ADN polimerază, conform instrucțiunilor producătorului (Applied Biosystems, Foster, CA, SUA). Condițiile PCR au fost 2 minute la 50°C, 10 minute la 94°C, 15 secunde la 95°C și 1 minut la 60°C timp de 40 de cicluri. Concentrația genei țintă a fost determinată utilizând metoda Ct comparativă (numărul ciclului prag la punctul de intersecție dintre graficul de amplificare și prag), conform instrucțiunilor producătorului.
