Ulei pur de Saposhnikovia divaricata pentru fabricarea lumânărilor și săpunurilor, ulei esențial de difuzor en-gros, nou pentru difuzoare cu arzător cu stuf

scurtă descriere:

 

2.1. Pregătirea SDE

Rizomii de SD au fost achiziționați sub formă de plantă uscată de la Hanherb Co. (Guri, Coreea). Materialele vegetale au fost confirmate taxonomic de Dr. Go-Ya Choi de la Institutul Coreean de Medicină Orientală (KIOM). Un specimen justificativ (numărul 2014 SDE-6) a fost depus în Herbarul Coreean de Resurse Standard din Plante Medicinale. Rizomii uscați de SD (320 g) au fost extrași de două ori cu etanol 70% (cu reflux de 2 ore), iar extractul a fost apoi concentrat sub presiune redusă. Decoctul a fost filtrat, liofilizat și depozitat la 4°C. Randamentul extractului uscat din materiile prime brute a fost de 48,13% (g/g).

 

2.2. Analiza cantitativă prin cromatografie lichidă de înaltă performanță (HPLC)

Analiza cromatografică a fost efectuată cu un sistem HPLC (Waters Co., Milford, MA, SUA) și un detector cu matrice de fotodiode. Pentru analiza HPLC a SDE, principalul-OStandardul de glucozilcimifugină a fost achiziționat de la Institutul Coreean de Promovare a Industriei Medicinii Tradiționale (Gyeongsan, Coreea) șisec-O-glucozilhamaudol și 4′-O-β-D-glucozil-5-O-metilvisaminolul a fost izolat în laboratorul nostru și identificat prin analize spectrale, în principal prin RMN și MS.

Probele SDE (0,1 mg) au fost dizolvate în etanol 70% (10 mL). Separarea cromatografică a fost efectuată cu o coloană XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, SUA). Faza mobilă a constat din acetonitril (A) și acid acetic 0,1% în apă (B) la un debit de 1,0 mL/min. S-a utilizat un program cu gradient în mai multe etape, după cum urmează: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) și 20–65% A (23–40 min). Lungimea de undă de detecție a fost scanată la 210–400 nm și înregistrată la 254 nm. Volumul injectat a fost de 10,0μL. Soluțiile standard pentru determinarea a trei cromone au fost preparate la o concentrație finală de 7,781 mg/mL (prim-O-glucozilcimifugină), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glucozil-5-O-metilvisaminol) și 31,125 mg/ml (sec-O-glucozilhamaudol) în metanol și păstrat la 4°C.

2.3. Evaluarea activității antiinflamatoriiIn vitro

2.3.1. Cultura celulară și tratarea probelor

Celulele RAW 264.7 au fost obținute de la American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, SUA) și cultivate în mediu DMEM conținând 1% antibiotice și 5,5% FBS. Celulele au fost incubate într-o atmosferă umidificată cu 5% CO2 la 37°C. Pentru a stimula celulele, mediul a fost înlocuit cu mediu DMEM proaspăt și lipopolizaharidă (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, SUA) la 1°C.μg/mL a fost adăugat în prezența sau absența SDE (200 sau 400μg/ml) pentru încă 24 de ore.

2.3.2. Determinarea oxidului nitric (NO), prostaglandinei E2 (PGE2), factorului de necroză tumorală -α(TNF-α) și producția de interleukină-6 (IL-6)

Celulele au fost tratate cu SDE și stimulate cu LPS timp de 24 de ore. Producția de NO a fost analizată prin măsurarea nitriților folosind reactivul Griess, conform unui studiu anterior [12]. Secreția citokinelor inflamatorii PGE2, TNF-α... și IL-6 a fost determinată utilizând un kit ELISA (sisteme R&D), conform instrucțiunilor producătorului. Efectele SDE asupra producției de NO și citokine au fost determinate la 540 nm sau 450 nm utilizând un aparat Wallac EnVision.™cititor de microplăci (PerkinElmer).

2.4. Evaluarea activității antiosteoartriticeIn vivo

2.4.1. Animale

Șobolanii Sprague-Dawley masculi (în vârstă de 7 săptămâni) au fost achiziționați de la Samtako Inc. (Osan, Coreea) și adăpostiți în condiții controlate, cu un ciclu lumină/întuneric de 12 ore la°C și% umiditate. Șobolanilor li s-a administrat o dietă de laborator și apăla discrețieToate procedurile experimentale au fost efectuate în conformitate cu ghidurile Institutului Național de Sănătate (NIH) și aprobate de Comitetul pentru Îngrijirea și Utilizarea Animalelor al Universității Daejeon (Daejeon, Republica Coreea).

2.4.2. Inducerea OA cu MIA la șobolani

Animalele au fost randomizate și repartizate în grupuri de tratament înainte de începerea studiului ((per grup). Soluție MIA (3 mg/50μL (soluție salină 0,9%) a fost injectat direct în spațiul intraarticular al genunchiului drept sub anestezie indusă cu un amestec de ketamină și xilazină. Șobolanii au fost împărțiți aleatoriu în patru grupe: (1) grupul salin fără injecție cu MIA, (2) grupul cu MIA cu injecție cu MIA, (3) grupul tratat cu SDE (200 mg/kg) cu injecție cu MIA și (4) grupul tratat cu indometacină (IM) (2 mg/kg) cu injecție cu MIA. Șobolanilor li s-a administrat oral SDE și IM cu 1 săptămână înainte de injecția cu MIA, timp de 4 săptămâni. Dozajul de SDE și IM utilizat în acest studiu s-a bazat pe cel utilizat în studiile anterioare [10,13,14].

2.4.3. Măsurători ale distribuției suportului de greutate la nivelul labei posterioare

După inducerea OA, echilibrul inițial al capacității portante a labelor posterioare a fost perturbat. Un tester de incapacitate (Linton instrumentation, Norfolk, Marea Britanie) a fost utilizat pentru a evalua modificările toleranței portante. Șobolanii au fost plasați cu grijă în camera de măsurare. Forța portantă exercitată de membrul posterior a fost mediată pe o perioadă de 3 secunde. Raportul de distribuție a greutății a fost calculat cu următoarea ecuație: [greutatea pe membrul posterior drept/(greutatea pe membrul posterior drept + greutatea pe membrul posterior stâng)] × 100 [15].

2.4.4. Măsurători ale nivelurilor serice de citokine

Probele de sânge au fost centrifugate la 1.500 g timp de 10 minute la 4°C; apoi serul a fost colectat și păstrat la −70°C până la utilizare. Nivelurile de IL-1β, IL-6, TNF-α...și PGE2 din ser au fost măsurate utilizând kituri ELISA de la R&D Systems (Minneapolis, MN, SUA), conform instrucțiunilor producătorului.

2.4.5. Analiză RT-PCR cantitativă în timp real

ARN-ul total a fost extras din țesutul articulației genunchiului folosind reactivul TRI® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SUA), transcris invers în ADNc și amplificat prin PCR folosind un kit TM One Step RT PCR cu SYBR green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, SUA). PCR cantitativ în timp real a fost efectuat folosind sistemul Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, SUA). Secvențele primerilor și secvența sondei sunt prezentate în Tabelul1Alicote de ADNc din probă și o cantitate egală de ADNc GAPDH au fost amplificate cu amestecul principal TaqMan® Universal PCR care conține ADN polimerază, conform instrucțiunilor producătorului (Applied Biosystems, Foster, CA, SUA). Condițiile PCR au fost 2 minute la 50°C, 10 minute la 94°C, 15 secunde la 95°C și 1 minut la 60°C timp de 40 de cicluri. Concentrația genei țintă a fost determinată utilizând metoda Ct comparativă (numărul ciclului prag la punctul de intersecție dintre graficul de amplificare și prag), conform instrucțiunilor producătorului.

Preț FOB:0,5 USD - 9.999 USD / bucată

Cantitate minimă de comandă:100 bucăți/bucăți

Capacitate de aprovizionare:10000 bucăți/bucăți pe lună